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■新譯通DNA重組技術(shù)翻譯公司 

重組DNA技術(shù)(recombinant DNA technique)又稱(chēng)遺傳工程,在體外重新組合脫氧核糖核酸(DNA)分子,并使它們在適當的細胞中增殖的遺傳操作。這種操作可把特定的基因組合到載體上,并使之在受體細胞中增殖和表達。因此它不受親緣關(guān)系限制,為遺傳育種和分子遺傳學(xué)研究開(kāi)辟了嶄新的途徑。   

廣義的遺傳工程包括細胞水平上的遺傳操作(細胞工程)和分子水平上的遺傳操作,即重組DNA技術(shù)(有人稱(chēng)之為基因工程)。狹義的遺傳工程則專(zhuān)指后者。

重組DNA技術(shù)來(lái)源于兩個(gè)方面的基礎理論研究——限制性核酸內切酶(簡(jiǎn)稱(chēng)限制酶)和基因載體(簡(jiǎn)稱(chēng)載體)。限制酶的研究可以追溯到1952年美國分子遺傳學(xué)家S.E.盧里亞在大腸桿菌中所發(fā)現的一種所謂限制現象——從菌株甲的細菌所釋放的噬菌體能有效地感染同一菌株的細菌,可是不能有效地感染菌株乙;少數被感染的菌株乙的細菌所釋放的同一噬菌體能有效地感染菌株乙可是不能有效地感染菌株甲。經(jīng)過(guò)長(cháng)期的研究,美國學(xué)者W.阿爾伯在1974年終于對這一現象提出了解釋?zhuān)J為通過(guò)噬菌體感染而進(jìn)入細菌細胞的DNA分子能被細菌識別而分解,細菌本身的DNA則由于已被自己所修飾(甲基化)而免于被分解。但有少數噬菌體在沒(méi)有被分解以前已被修飾了,這些噬菌體經(jīng)釋放后便能有效地感染同一菌株的細菌。被甲(或乙)這一菌株所修飾的噬菌體只能有效地感染甲(或乙),而不能有效地感染乙(或甲),說(shuō)明各個(gè)菌株對于外來(lái)DNA的限制作用常常是專(zhuān)一性的。通過(guò)進(jìn)一步的研究發(fā)現這種限制現象是由于細菌細胞中具有專(zhuān)一性的限制性核酸內切酶的緣故。   

重組DNA技術(shù)中所用的載體主要是質(zhì)粒和溫和噬菌體(見(jiàn)轉導)兩類(lèi),而在實(shí)際應用中的載體幾乎都是經(jīng)過(guò)改造的質(zhì);驕睾褪删w。英國微生物遺傳學(xué)家W.海斯和美國微生物遺傳學(xué)家J.萊德伯格等在1952年首先認識到大腸桿菌的F因子(見(jiàn)細菌接合)是染色體外的遺傳因子。1953年法國學(xué)者P.弗雷德里克等發(fā)現大腸桿菌產(chǎn)生大腸桿菌素這一性狀為一種染色體外的大腸桿菌素因子所控制。1957年日本學(xué)者發(fā)現了抗藥性質(zhì)粒。后兩類(lèi)質(zhì)粒都是在遺傳工程中廣泛應用的質(zhì)粒。   

重組DNA技術(shù)中廣泛應用的噬菌體是大腸桿菌的溫和噬菌體λ,它是在1951年由美國學(xué)者E.萊德伯格等發(fā)現的。   

到70年代初,生物化學(xué)研究的進(jìn)展也為重組DNA技術(shù)奠定了基??972年美國的分子生物學(xué)家P.伯格等將動(dòng)物病毒SV40的DNA與噬菌體P22的DNA連接在一起,構成了第一批重組體DNA分子。1973年美國的分子生物學(xué)家S.N.科恩等又將幾種不同的外源DNA插入質(zhì)粒pSC101的DNA中,并進(jìn)一步將它們引入大腸桿菌中,從而開(kāi)創(chuàng )了遺傳工程的研究。

重組DNA技術(shù)一般包括四步:①產(chǎn)生DNA片段;②DNA片段與載體DNA分子相連接;③將重組DNA分子導入宿主細胞;④選出含有所需要的重組體DNA分子的宿主細胞。在具體工作中選擇哪條技術(shù)路線(xiàn)。主要取決于基因的來(lái)源、基因本身的性質(zhì)和該項遺傳工程的目的。   

重組DNA片段的取得 主要的方法有:①利用限制酶取得具有粘性末端或平整末端的DNA片段;②用機械方法剪切取得具有平整末端的DNA片段,例如用超聲波斷裂雙鏈DNA分子;③經(jīng)反向轉錄酶的作用從mRNA獲得與mRNA順序互補的DNA單鏈,然后再復制形成雙鏈DNA(cDNA)。例如人的胰島素和血紅蛋白的結構基因都用這方法獲得。這樣獲得的基因具有編碼蛋白質(zhì)的全部核苷酸順序,但往往與原來(lái)位置在染色體上的基因在結構上有區別,它們不含有稱(chēng)為內含子的不編碼蛋白質(zhì)的間隔順序(見(jiàn)基因);④用化學(xué)方法合成DNA片段。從蛋白質(zhì)肽鏈的氨基酸順序可以知道它的遺傳密碼。依照這密碼用化學(xué)方法可以人工合成基因。

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